sábado, 22 de febrero de 2014

Análisis de la Muestra de Espermatozoides




Instituto Politecnico Nacional

Escuela Nacional de Medicina y Homeopatia
Medico Cirujano y Partero

Embriologia Humana 1


Práctica 2 
"Análisis de la Muestra de Espermatozoides"



Introducción
Gametogénesis

La gametogénesis es la formación de gametos por medio de la meiosis a partir de células germinales. Los gametos o células reproductoras son células haploides, que contienen la mitad del número de cromosomas que las células somáticas y son diploides. Los cromosomas son estructuras formadas por ADN, ácido desoxirribonucleico, la molécula que contiene la información de las características de cada individuo, de cada especie (información genética). 

El cariotipo humano: se trata de los 46 cromosomas de una célula somática diploide, ordenados de a pares, y numerados. Como vimos cuando estudiamos el concepto de sexo, el par Nº 23 determina el sexo cromosómico; en este caso se trata de un cariotipo femenino.


Meiosis

La meiosis es la división celular que permite la reproducción sexual. Comprende dos divisiones sucesivas: una primera división meiótica, que es una división reduccional, ya que de una célula madre diploide (2n) se obtienen dos células hijas haploides (n); y una segunda división meiótica, que es una división ecuacional, ya que las células hijas tienen el mismo número de cromosomas que la célula madre (como la división mitótica). Así, dos células n de la primera división meiótica se obtiene cuatro células n. Igual que en la mitosis, antes de la primera división meiótica hay un período de interfase en el que se duplica el ADN. Sin embargo, en la interfase de la segunda división meiótica no hay duplicación del ADN.

En ella las espermátidas se convierten en espermatozoides, reduciendo para ello el citoplasma, el núcleo se alarga y queda en la cabeza del espermatozoide, las mitocondrias se colocan en el cuello y los centriolos originan un flagelo o cola. La serie de cambios que experimentan las espermátides para su transformación en espermatozoide recibe el nombre de espermiogénesis. Estos cambios son:

a) Condensación del núcleo. El núcleo cambia de tamaño, haciéndose más pequeño y denso, y de forma, adquiriendo un aspecto aplanado con una forma oval si se observa desde arriba y piriforme si se observa desde el lateral.
b) Formación de acrosoma. El acrosoma se dispone en el extremo apical y está rodeado por dos membranas, una externa y una interna. El interior del acrosoma está compuesto por vesículas que son generadas por el aparato de Golgi las cuales se agrupan y generan esta caperuza apical tras girar el núcleo. El acrosoma es por tanto un lisosoma especializado que contiene principalmente hialuronidasa, un enzima que hidroliza el ácido hialurónico y que ayuda al espermatozoide a penetrar en el óvulo durante la fecundación.
c) Desarrollo del flagelo. El flagelo se desarrolla a partir del centriolo distal de la espermátide y está compuesto por un cilindro de nueve microtúbulos que rodean a dos únicos centrales. Esta estructura se sitúa en la base de la cabeza (formada por el núcleo y el acrosoma) durante la rotación del núcleo. El flagelo completo estaría compuesto por cuatro partes: cuello, pieza media, pieza principal y pieza final.
d) Eliminación de la mayor parte del citoplasma. El citoplasma es reducido en su mayor parte, bien porque es fagocitado por las células de Sertoli o porque es abandonado en el interior de los túbulos. Puede permanecer unido al espermatozoide durante un tiempo.

ESPERMATOGÉNESIS

La espermatogénesis es el proceso mediante el cual se desarrollan los gametos masculinos. Inicia en la 
adolescencia y se lleva a cabo en los túbulos seminíferos. Las células en los túbulos seminíferos se disponen 
alrededor del lúmen, las espermatogonias se encuentran en la base del epitelio y proliferan por mitosis.


Morfologia del Espermatozoide

Esta célula tiene una cabeza o regíón cefálica ovoidea en visión frontal y piriforme en visión lateral, constituida por el núcleo condensado y además una cola que le permite la movilidad necesaria para atravesar las distintas cubiertas que rodean al ovocito y llegar al espacio perivitelino. La cabeza está constituida por el núcleo y el acrosoma. Este último determina en la superficie cefálica la existencia de dos regiones claramente definidas en imágenes de SEM, la región acrosomal (RA) y la región postacrosomal (RP), separadas ambas por una fina banda de transición denominada segmento ecuatorial (SE), no siempre claramente definido. En la cola del espermatozoide existen cuatro regiones que pueden ser diferenciadas por la naturaleza de las estructuras que rodean al axonema. Desde su origen, en la cabeza o base, hasta el extremo terminal, estas regiones estudiadas con SEM son la pieza de conexión (PC), la pieza intermedia (PI), la pieza principal (PP) y la pieza terminal (PT). La PC o cuello, como su propio nombre indica, es la parte que une la cabeza con el resto del flagelo. La PI es el segmento de la cola donde se localizan las mitocondrias y finalmente la PP se va estrechando gradualmente a medida que se aproxima a la PT


Alteraciones Morfologicas del Espermatozoide

Espermatozoides sin cabeza, anucleados, en cabeza de alfiler o decapitados  Se trata de espermatozoides acéfalos, por tanto sin su material genético, Estos espermatozoides cuando se observan “in vitro” pueden presentar movilidad progresiva. Espermatozoides Bicéfalos: Espermatozoides con dos cabezas y un solo flagelo, normalmente la pieza intermedia aparece engrosada.
Espermatozoides con cabezas alargadas o “tapering”  En este caso la cabeza de los espermatozoides posee la forma de una elipse en la que existe un marcado predominio del eje longi-tudinal (5 a 6 μm) sobre el eje transversal (2 a 3μm).  Espermatozoides con cabezas redondas, a diferencia del caso anterior, aquí ambos ejes tienden a ser similares lo que le da un aspecto esferoideo.  
Espermatozoides con implantación axial anómala del flagelo ,en estos casos observamos una estrangulación a nivel de la pieza intermedia, que se une a la fosa de implantación formando un ángulo de 45-90º con respecto al eje longitudinal de la cabeza. Espermatozoides sin flagelo, se observan solamente cabezas de espermatozoides aisladas con ausencia total de cola. Espermatozoides con flagelos múltiples: podemos encontrar espermatozoides con dos o más flagelos. Espermatozoides con pieza intermedia marcadamente engrosada, en ocasiones se observan espermatozoides cuya pieza intermedia puede incluso superar el tamaño cefálico.

 Espermatozoides con persistencia de gota citoplasmática,este es un tipo de anomalía difícil de diagnosticar debido a que se pueden confundir con piezas intermedias engrosadas. Alteraciones de la forma a nivel del resto del flagelo:(A) Espermatozoides con enrollamiento total de la cola con o sin restos citoplasmáticos englobándola:
Espermatozoides con enrollamiento parcial de la cola, en estos casos observamos que el enrollamiento de la cola afecta solamente al extremo final de la misma.
Espermatozoides con flagelos truncados: Los flagelos tienen en la parte principal angulaciones de diferentes grados.

Caracteristicas del Semen

Ø  El volumen promedio de semen de una eyaculación es de 1.5 a 4 ml, aunque si hay un periodo de abstinencia de 3 a 7 días puede eyacular un máximo de 5ml. (depende de la abstinencia y del nivel de excitación)
Ø  El cuerpo elimina el semen almacenado por sí mismo, si no se eyacula durante un tiempo se suelen producir poluciones nocturnas (sueños húmedos)
Ø  El color el semen es normalmente blanduzco o blanco lechoso o levemente amarillento.
Ø  Si el color del semen es anaranjado o rojizo, el semen puede contener sangre (a esto se le conoce como hematospermia)
Ø  El semen suele contener una consistencia de coagulo, debido a la facilidad de solidifacion gracias al fosfato de espermina y algunas otras proteínas. A veces pueden aparecer unos grumos pero esto no es un indicador de algún problema.
Ø  El olor es peculiar (puede ser muy intenso), para algunas personas es desagradable para otras es excitante. Algunas personas dicen que puede tener un sabor dulce y afrutado, esto es por las proteínas alcalinas.
Ø  El pH del semen es de 7,5.esto favorece a los espermatozoides cuando se encuentran en la vagina, donde el pH es acido.
Ø  Menos del 10% del semen de una eyaculación corresponde a los espermatozoides.
Ø  Más del 90% del volumen del semen en una eyaculación corresponde al líquido seminal.
Ø  La densidad normal de los espermatozoides en el semen varia de 50 a 150 millones por mililitro, por lo que cada eyaculación tiene de 20 a 150 millones por centímetro cubico de espermatozoides.
Ø  En caso de infección del organismo el semen puede tener altas concentraciones de virus.

FÁRMACOS QUE ALTERAN EL ESPERMATOZOIDE

Los efectos secundarios de los fármacos no afectan a todos los pacientes, ni en la misma medida. Dentro de estos fármacos, hay algunos que pueden afectar de manera sensible a la producción de espermatozoides. Drogas y medicamentos que pueden deteriorar la fertilidad del varón a través fundamentalmente de cuatro mecanismos:
o   por acción gonadotóxica directa,
o   por trastornos del eje hipotálamo-hipofisario-gonadal,
o   alterando la eyaculación y la función eréctil y/o   causando efectos negativos sobre la líbido.

Estos tóxicos afectan a la espermatogénesis actuando sobre las células germinales en el testículo o inhibiendo la función de sostén de las células de Sertoli. Producen una disminución de la formación de los espermatozoides y alteran la maduración, movilidad, o morfología de los mismos. El efecto tóxico puede ser reversible al suspender el agente nocivo o con el paso del tiempo, aunque no siempre ocurre así. Otras sustancias, como tratamientos hormonales, esteroides anabolizantes o algunos medicamentos psiquiátricos, interfieren la retroalimentación del eje hipotalámico-hipofisario. Por ello producen concentraciones anormales de testosterona.

Determinadas drogas pueden producir eyaculación retrógrada al bloquear los reflejos medulares o inhibir la emisión, y provocar una aneyaculación.Otros fármacos pueden ocasionar disfunción eréctil al dificultar los fenómenos mediados por las estructuras neurológicas o vasculares que son necesarias para conseguir una  función eréctil normal. Dentro de las múltiples sustancias que según estos mecanismos pueden afectar la fecundidad en los varones nos centraremos en las que, de manera más concreta, pueden afectar a los pacientes con IRCT, tanto en hemodiálisis como una vez ya trasplantados.


Conceptos

  • h Motilidad espermática: Movimiento espontaneo del espermatozoide.
  • §  Viabilidad: Capacidad para seguir viviendo.
  • §  Azoospermia: Ausencia de espermatozoides en el semen. Se asocia a infertilidad pero no a impotencia.
  • §  Oligospermia: Cantidad insuficiente de espermatozoides en el semen.
  • §  Teratospermia: Alteraciones morfológicas en los espermatozoides que afectan la capacidad reproductiva.
  • §  Cuenta espermática: Conteo de los espermatozoides que contiene el semen en una eyaculación.
  • §  Viscosidad de la muestra de semen: Capacidad de una muestra de semen para fluir.

Metodología

1.- Obtencion de la muestra, los compañeros nos proporcionaron las muestras de semen fresca en un vaso de plastico (coopropack) esteril.
2.- Se coloco una gota de semen en un portaobjetos con la pipeta pasteur y se cubrio con un cubreobjetos.
3.-  Se observo en el microscopio a 10X y 40X.
4.- Posteriormente, la muesta se tinió con azul de metileno.
5.- Se volvio a observar a 10X y 40X en el microscopio óptico.

Resultados

En la primera muestra pudimos encontrar a espermatozoides con morfología normal en la muestra de semen obtenida, pero también se encontraron alteraciones morfológicas en los espermatozoides de la muestra como espermas con cabeza alargada, espermas con doble flagelo y espermas con microcefalia pero en muy pocas cantidades.

y En el segundo se le tiño con azul de metileno para ver si son viables o no lo son, para poder comprobar esto nos da que los q si se tiñeron con el azul de metileno son viables y pueden fagocitar mientras q los que no se tiñeron no son viables por que tienen un problema con la membrana.



     Conclusión
      
       En esta práctica pudimos encontrar algunas alteraciones morfológicas en los espermatozoides como ya mencionados en los resultados obtenidos al realizarlo, pero esto es normal en un hombre al tener estos espermas anormales, siempre y cuando sean escasos, pero los que predominaron fueron espermatozoides con morfología norma.




martes, 18 de febrero de 2014

La gametogénesis y una embarradita de gonadogénesis (Para Dummies)

PRÁCTICA Nº 1 EMBRIOLOGÍA HUMANA

-GAMETOGÉNESIS



A) Objetivos.

  •  Observar en el microscopio las diferencias del testículo de ratón  y del ovario de ratón.
  • Encontrar las diferentes partes de la célula
  • Hacer un esquema de lo observado a 10x y a 40x
  • saber cuáles son las células gonadales
  • Responder que es gametogénesis, e identificar las células de macho y hembra



 B) Introducción.
 Embriología
Desde hace miles de años el ser humano ha intentado descubrir como funciona el mundo que lo rodea y como es que fue creado ese mismo entorno, de esta manera surge la pregunta: ¿Cómo es que fuimos creados nosotros, los humanos? La Embriología es una rama de la Biología y su objetivo principal es estudiar el desarrollo humano antes del nacimiento, desde el momento en que se generan las células sexuales en las gónadas, la fecundación, la formación de los primeros tejidos y el desarrollo del embrión, hasta que termina esta fase de desarrollo y, el ahora feto, comienza a crecer y nutrirse.
Estudiar y comprender estos primeros meses del desarrollo humano es sumamente importante para entender muchas de la patologías que se presentan después del nacimiento. Actualmente se pueden detectar muchas anomalías durante los primeros meses de formación, igualmente se han logrado descubrir numerosas patologías  causadas por anomalías genéticas y, hasta cierto punto, prevenirlas.
Podemos ver que la Embriología es de gran importancia para la Medicina actualmente, pues se relaciona también con otras áreas como fertilidad, genética, etc., así mismo nos ayuda a comprender como es que se forman los órganos del cuerpo, por ejemplo el desarrollo del corazón, el cerebro o para conocer los complicados procesos que se inician dentro de las gónadas y que no se completarán hasta que el individuo alcance la pubertad.
La Embriología igualmente se relaciona con temas tan controversiales como el aborto, tratando de establecer en que punto del desarrollo de un embrión puede considerársele un ser vivo y con plenos derechos, y está estrechamente relacionada con un tema que ha sido tabú durante largo tiempo, la sexualidad, pues la reproducción sexual es justamente el inicio del proceso de creación de este nuevo ser humano. La célula gamética del hombre, el espermatozoide, de determinar el sexo de nuestro embrión, XX en caso de ser mujer o XY en caso de ser hombre. La plena identificación de estos cromosomas sexuales es sumamente importante, no solo para conocer el sexo del embrión, también para detectar patologías relacionadas con anomalías en este par sexual de cromosomas.
Estos son solo algunos de los beneficios que tiene estudiar las primeras etapas de desarrollo de los seres vivos para la Biología en general y mas específicamente para la Medicina, es necesario reconocer la importancia de la Embriología como una herramienta sumamente útil para el Médico y es por esto que debe ser conocida ampliamente por el estudiante de Medicina.
Gametogénesis
 La gametogénesis es la formación de gametos por medio de la meiosis a partir de células germinales. 



  • -Espermatogénesis

La espermatogénesis es el proceso mediante el cual se desarrollan los gametos masculinos. Inicia en la 
adolescencia y se lleva a cabo en los túbulos seminíferos. Las células en los túbulos seminíferos se disponen 
alrededor del lúmen, las espermatogonias se encuentran en la base del epitelio y proliferan por mitosis. Existen 
dos tipos de espermatogonias las tipo A y B. Las espermatogonias tipo A se encargan de dividirse y dan origen 
a espermatogonias tipo B que son las que van a diferenciarse en espermatozoides. Las descendientes de las 
espermatogonias tipo B son las que entran a la primera diversión meiótica duplicando su material genético y 
son los espermatocitos primarios; siendo su material genético 2n4c. Cuando se completa la primera división 
meiótica el resultado son dos espermatocitos secundarios cuyo complemento cromosómico es 1n2c. Por cada 
espermatocito secundario que entra a meiosis II se obtienen dos espermátides, que madurarán para formar 
espermatozoides. 

Las células de Sertoli se encuentran también en los túbulos seminíferos y se encargan de dar sostén y nutrir a 
los gametos en diferenciación, de igual manera forman la barrera hematotesticular, necesaria para proveer un 
sitio de inmunoprivilegio para los gametos. Desde los espermatocitos primarios hasta los espermatozoides en 
el proceso de diferenciación se hacen acreedores de proteínas antigénicas diferentes a las del resto de las 
células corporales, por lo que necesitan estar en un lugar fuera del alcance del sistema inmunológico para no 
ser víctimas del mismo. 

La maduración de los espermátides en espermatozoides es un proceso denominado espermiogénesis. Los 
eventos más importantes de éste proceso serán nombrados a continuación: 
1. Reducción del tamaño nuclear. 
2. Condensación del material genético por la sustitución de las histonas por protaminas. 
3. Formación de la vesícula acrosómica a partir del aparato de golgi. 
4. Crece un flagelo a partir de la región centriolar. 
5. Las mitocondrias se acomodan en la parte proximal del flagelo. 
6. El citoplasma se reduce y se separa formando el cuerpo residual. 

El tiempo total de duración del proceso de espermatogénesis y espermiogénesis es de 64 días. La maduración 
bioquímica se lleva a cabo en el epidídimo y posteriormente cuando los espermatozoides entran en contacto 
con el líquido seminal y el prostático. 
El porcentaje de espermatozoides anómalos maduros es del 10% y si se eleva por encima del 20% es probable 
que exista repercusión en la fertilidad del individuo. 

La Espermatogénesis se lleva a cabo bajo influencias hormonales. La LH, secretada por la hipófisis, estimula a 
las células de Leydig induciendo la síntesis de testosterona. La testosterona se distribuye en todos los tejidos 
del cuerpo, se convierte en dehidrotestosterona y es la encargada de desarrollar las características sexuales 
secundarias. Las células de Sertoli tiene receptores para FSH, cuando reciben este estímulo convierten parte de 
la testosterona en estrógenos. La inhibina, producida por las células de Sertoli, actúa como regulador negativo 
de la secreción de FSH.


  • Ovogénesis

En la corteza del ovario se hallan folículos en diferentes grados de desarrollo, dentro de los cuales se encuentra el ovocito.
El folículo desarrolla, junto con el ovocito, siguiendo la siguiente secuencia:
• Folículo primordial
• Folículo primario
• Folículo secundario
• Folículo maduro (o de D’Graff).


La ovogénesis es el proceso de formación y maduración del óvulo.

a) Fase de proliferación. La ovogénesis comienza con su proliferación, por mitosis en el ovario, durante el desarrollo prenatal, generando un enorme número de células, los ovogonios (2n)

b) Crecimiento. También antes del nacimiento, éstas crecen, con lo que se originan muchos ovocitos primarios (2n).

c) Maduración. Cada uno de ellos inicia la primera división meiótica, pero detienen este proceso en la profase, de modo que una mujer nace con miles de ovocitos primarios detenidos en la profase de la primera división meiótica.

La mujer al nacer tiene, aproximadamente, 400 000 folículos primordiales, de los cuales, en la etapa fértil, sólo se llegan a desarrollar aproximadamente 400.


C)Método.
PROCEDIMIENTO
1.     Conectar el microscopio
2.     Colocar con el macro la altura deseada para poder poner la preparación
3.     Poner la preparación y fijarla con la pinza
4.     Prender la lámpara del microscopio
5.     Acomodar la platina
6.     Enfocar la preparación (ovario o testículo del raton) con el microscopio
7.     Observar lo que se ve con el objetivo de 10x
8.     Cambiar el objetivo de 10x por el de 40x
9.     Enfocar la preparación
10.  Observar la preparación una vez enfocada
11.  Dibujar la observación de la preparación
12.  Repetir el mismo procedimiento con la otra preparación
13.  En el esquema realizado de lo visto señalar las partes que se encontraron en las células

 Testículo de rata 10x

Ovario de rata 10x

Testículo de rata 40x


Ovario de rata 40x

Se pueden presenciar los espermatozoides, así como las espermátides etc.





D) Conclusiones.

A partir de lo estudiado teóricamente en clases como la investigación realizada previamente para esta práctica, se pudo observar y distinguir con mayor facilidad las estructuras que componen a las gonadas.
De igual forma se logro visualizar de manera más clara el proceso y las fases por las que tienen que pasar los gametos para poder dar origen al ovocito y la esperma.
Debido a que las muestras con las que se trabajaron pertenecían a un roedor encontramos algunas características de esta especie como lo es la morfología de los espermatozoides y en el ovocito se podía encontrar una gran cantidad de folículos en comparación a un ovocito humano, lo anterior se debe a que cada especie está diseñada para poder dar vida a cierto número de individuos.


E) Bibliografía.